茚三酮为显色剂分光光度法测定氨苄西林钠.pdf

第29卷第3期
应用化学
Vol 29 Iss. 3
2012年3月
CHINESE JOURNAL OF APPLIED CHEMISTRY
Mar.2012
茚三酮为显色剂分光光度法测定氨苄西林钠
张亚秋
(辽宁医学院药学院锦州121001)
摘要采用分光光度法研究了氨苄西林钠与茚三酮间的显色反应。确定了反应条件,建立了一种快速、简
便测定氨芋西林钠的分光光度法。实验表明,氨苄西林钠与茚三酮在pH=5.4的水溶液中,沸水浴1h可以
反应完全,产物在入=564m下,表观摩尔吸光系数为3.72x103L/(mol-cm)。氨苄西林钠质量浓度在
10~90mg/L范固内服从比耳定律,相关系数为0.981,当氨苄西林钠浓度为40mg/L时,测定结果的相对
标准偏差为1.5%(n=6),回收率在99.0%以上.。
关键词氨苄西林钠,茚二酮,分光光度法
中图分类号:0657.3
文献标识码:A
文章编号:1000-0518(2012)03031604
DOI:10.3724/SP.J.1095.2012.00160
氨苄西林钠化学名为(2S,5R,6R)-3,3-二甲基6-(R)2-氨基2-苯乙酰氨基7-氧代4-硫杂-1-氮杂
双环[3.2.0]庚烷2-甲酸钠盐,主要用于治疗敏感菌引起的肺部、肠道、胆道、尿路等感染和败血症,如
牛的巴氏杆菌病、肺炎、乳腺炎、子宫炎、肾盂肾炎、犊白痢和沙门氏菌肠炎等;马的支气管肺炎、子宫炎、
腺疫、驹链球菌肺炎和驹肠炎等;猪的肠炎、肺炎、丹毒、子宫炎和仔猪白痢等;羊的乳腺炎、子宫炎和肺
炎等。氨苄西林钠的主要测定方法有浊度法、荧光法1、化学发光法]、离子对色谱法的、气相色谱
法?、酶联免疫吸附法和高效液相色谱法9?。但利用氨苄西林钠与茚三酮之间的显色反应测定其
含量的方法尚未见报道,鉴于氨苄西林钠分子中含有a-氨基,本研究利用氨苄西林钠与茚三酮的显色
反应,建立了简便、快捷的分光光度法,并用该法测定了针剂中氨苄西林钠的含量,结果与反相高效液相
色谱梯度洗脱法]一致。
1实验部分
1.1试剂和仪器
UV-757CRT型紫外-可见分光光度计(上海精密仪器有限责任公司);PHS-3C型酸度计(上海伟业
仪器厂)。
0.5g/L氨苄西林钠(对照品,中国药品生物制品检定所,批号130410-200706,含量85.7%)水溶
液;10g工茚三酮水溶液;0.1mol/L柠檬酸-氢氧化钠缓冲溶液(pH=.5)。所用试剂均为分析纯,实
验用水为去离子水。
1.2实验方法
取氨苄西林钠适量(≤0.50mg)于10mL比色管中,加人茚三酮溶液2.0mL,pH=5.4的
0.1moLL柠檬酸-気氧化钠缓冲溶液1.5mL,在沸水浴中加热1h,取出后冷却至室温,用溶剂稀释至刻
度,以试剂空白为参比,在A=564nm处测定吸光度。
2结果与讨论
2.1吸收光谱
按实验方法配制溶液,以试剂空白为参比,在350~800nm范围内扫描,结果表明,氨苄西林钠无吸
收,茚三酮有部分吸收,氨苄西林钠与茚三酮反应产物的最大吸收波长在402和564nm(图1),本方法
2011-04-19收稿,2011-07-05修回
通讯联系人:张亚秋,高级实验师;Tel.04164673316;Fax:0416-2832464;E-mail:2 4q zyq168@163,com;研究方向:药物分析
第3期
张亚秋:茚三闹为显色剂分光光度法测定氨苄西林钠
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选择564mm为测定波长。
2.2反应时间及稳定性
取氨苄西林钠溶液适量于10mL比色管中,加
人茚三酮溶液2.0mL,pH值为5.4的0.1mol/L柠
檬酸-氢氧化钠缓冲溶液1.5mL,在沸水浴中分别<04
加热40、45、50、55、60、65、70、75和80min,取出后
冷却至室温,用溶剂稀释至刻度,以试剂空白为参02
比,在564nm处测得吸光度值为0.449、0.517
0.564、0.563、0.582、0.576、0.546、0.643和0.487。
400
结果表明,反应在1h内可以进行完全,并且在室温
下放置40min吸光度值基本保持不变。
图1氨苄西林钠与茚三酮反应产物(a)和茚三酮
2.3反应温度的影响
(b)的吸收光谱
e complex Iorm
取氨苄西林钠溶液于10mL比色管中,加入茚
ig. 1 Absorption spectra of the
between ninhydrin and ampicillin sodium(a) and
三酮溶液2.0mL,pH=5.4的0.1mol/L柠檬酸-氢
ninhydrin (b
氧化钠缓冲溶液1.5mL,在不同温度水浴中加热
h,取出后冷却至室温,用溶剂稀释至刻度,以试剂空白为参比,在564nm处测定吸光度,当温度分别为
75、80、85、90、95和100℃时,测得溶液吸光度值为0.019、0.1380.246、0.375、0.499和0.595,说明反
应在沸水浴中进行灵敏度较高。
2.4酸度的影响
取氨苄西林钠溶液于10mL比色管中,加入茚三酮溶液2.0mL,加入不同pH值的0.1mol/L柠檬
酸-氢氧化钠缓冲溶液1.5mL,在沸水浴中加热1h,取出后冷却至室温,用溶剂稀释至刻度,以试剂空
白为参比,在564nm处测定吸光度,数据见表1。根据实验结果确定反应的最佳酸度是pH=5.4。
表1酸度的影响
Table 1 Effect of PH value on the absorbance
5.0
5.2
5.6
Absorbance
0.057
0.191
0.
389
0.539
0.492
0.452
0.392
2.5緩冲溶液用量的影响
取氨苄西林钠溶液于10mL比色管中,加人茚三酮溶液2.0mL,加入不同体积pH=5.4的
0.1mol/L柠檬酸-氢氧化钠缓冲溶液,在沸水浴中加热1h,取出后冷却至室温,用溶剂稀释至刻度,以
试剂空白为参比,在564nm处测定吸光度,数据见表2。实验结果显示缓冲溶液用量为1.5mL体系的
灵敏度最高。
表2缓冲溶液用量的影响
Table 2 Effect of the volume of buffer solution on the absorbance
Volume of buffer solution/ml,
0.5
1.0
2.0
3.0
Absorbance
0.570
0.544
0.511
0.465
2.6试剂用量的影响
取氨苄西林钠溶液适量于10mL比色管中,加人pH=5.4的0.1mol/工柠檬酸-氢氧化钠缓冲溶液
1.5mL,加入不同体积的茚三酮溶液,在沸水浴中加热1h,取出后冷却至室温,用溶剂稀释至刻度,以试
表3试剂用量的影响
Table 3 Effect of the volume of reagent on the absorbance
Volume of
0.5
1.0
2.0
Absorbance
0.389