电泳技术和常用电泳仪_百替生物.pdf

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第幸史泳故木和常用电泳
仪
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基本要求
重点难点
讲授学时
内容提要
基本要求
1.了解
1.1常用的电泳仪简介
1.2电泳仪的技术主要指标
1.3电泳技术的分类
4电泳仪临床应用实例
1.2熟悉
1.2.1毛细管电泳仪基本工作原理
1.2.2毛细管电泳仪的基本结构
1.2.3电泳方法简介
1.2.4常用电泳仪设备
1.3掌握
3.1电泳基本原理
1.3.2影响电泳的外界因素
3.3毛细管电泳的特点
3.4毛细管电泳分离模式
1.3.5与毛细管电泳相关的基本概念
1.3.6电泳技术的质量控制
2重点难点
2.1重点
1.1电泳基本原理
2.1.2毛细管电泳分离模式
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2.1.3毛细管电泳的特点
2.1.4影响电泳的外界因素
2.2难点
2.2.1电泳方法简介
2.2.2毛细管电泳分离模式
2.2.3电泳技术的质量控制
讲授学时
建议4~6学时
4内容提要
4.1电泳原理
4.1.1电泳基本原理
物质分了在正常情況下一般不帯电,即所帯正负电荷量相等,故不显示帯电性。但是在一定的物
理作用或化学反应条件下,某些物质分子会成为带电的离子(或粒子),不同的物质,由于其带电性质
颗粒形状和大小不同,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,因此可使它们分离。
若溶液里一电量为Q的带电粒子,在场强为F的电场中以速度移动,则它所受到的电场力F
应为
F=QE
根据斯托克司定律,在液体中泳动的球状粒子所受到的阻力F’为:
F'=6:1rU
式中n为介质的粘度系数,r为粒子半径。
当二力平衡,即F=F'时,粒子作匀速泳动,且有
=QE/6。7r
6-3)
4.⊥.2影响电泳的外界因素
电场强度、溶液的pll值、溶液的离子强度、电渗作用、粒子的迁移率、吸附作用。
4.2常用电泳仪的基本结构、工作原理和技术指标
4.2.1电泳技术的分类
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电泳技术的分类通常可按照电泳实验条件的某一特征,日前常用分类如根据工作原理、支持载体
的位置或形状、有无固体支持物、支持物的特点、电源控制、自动化程度、功能、用法、使用日的分
类等米命名。
4.2.2常用电泳仪设备
通常所说的电泳设备分为主要设各(分离系统)和辅助设备(检测系统)。主要设备指电泳仪
电源、电泳槽。
4.2.2.⊥电泳电源
电泳电源是建立电泳电场的装置,它通常为稳定(输出电压、输出电流或输出功率)的直流电源
而且要求能方便地控制电泳过程中所需电压、电流或功率。
4.2.2.2电泳槽
电泳槽是样品分离的场所,是电泳仪的一个主要部件。槽内装有电枚、缓冲液槽、电泳介质支架
等。电泳槽的种类很多,如单垂直电泳槽、双垂直电泳槽、卧式多用途电泳槽、圆盘电泳槽、管板两
用电泳槽、薄层等电聚焦电泳槽、琼脂糖水平电泳槽、盒式电泳槽、垂直可降电泳槽、垂直夹心电
泳槽、U型管电泳槽、DNA序列分析电泳槽、转移电泳槽等。下图是垂直式电泳槽装置(图61)。
支持介质
电板
电极端闻介励桥阿电极隔间
图61垂直式电泳槽装置示意图
1.2.2.3附加装置
辅助设备指恒温循环冷却装置、伏时积分器、凝胶烘器等。有的还有分析检测装置。
4.3.电泳方法简介个
电泳技术发展迅速,方法种类繁多,以下简単介绍儿种电泳方法
4.3.1纸电泳
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百替生物
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纸电泳(PE)是指用滤纸作为支持载体的电泳方法。是最早使用的区带电泳,由于操作简单方便,
因此在很多领域得以广泛应用。比如,分离、确定某些蛋白质,如糖蛋白、脂蛋白等,尤其是在分离
氨基酸的混合物时,PF是一种很有价值的分析技术。在这种平卧式滤纸电泳装置(见图6-2)中,将滤
纸条水平地架设在两个装有缓冲溶液的谷器之间,样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后,再
盖:绝缘密封罩,即由电泳电源输入直流电压(100V~1000)进行电泳。
了
也极
地极
缘板
图6-2平卧式电泳槽装置示意图
4.3.2乙酸纤维素薄膜电泳
乙酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素乙酸酯。由该物质制成的薄膜称为乙酸纤维素
薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳特
点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情況下微量异常蚩白的检测。
4.3.3疑胶电泳
由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式,被称为凝胶电泳。因此,该
凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。在临床生化检验中常用于LDI、CK等同
工海的检测
4.3.4等电聚焦电泳
等电聚焦电泳是20世纪60年代中期问世的,一种利用有出值梯度的介质,分离等电点不同的蛋
白质的电泳技术。因为这种电泳方法具有很高的分辩率,所以在等电点上?要有0.01pl单位的差异就
能被满意地分离。因此,特别适合于分离分了子量相近而等电点不同的蛋白质纠分。
等电聚焦电泳法的特点①使用两性载体电解质,在电极之间形成稳定、连续、线性的pH梯度;②由于
“聚焦效应”,即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面;③电泳速度快;④分辨率高;⑤加入样
品的位置任意选择;⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点;つ适用手中、大分子量(如蛋白质、肽类
同工酶等)生物组分的分离分析。
4.3.5等速电冰
等速电泳(CTTP)是一种“移动界面”电泳技术。是电泳中惟一的分离纽分与电解质一起向前移
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