第26卷第4期
分析科学学报
2010年8月
Vol 26 No 4
JOURNAL OF ANALYTICAL SCIENCE
Aug.2010
文覃编号:100661442010)04040906
高效液相色谱串联质谱內标法同时测定水产品中
15种喹酮类药物残留量
王志杰,冷凯良”,孙伟红,宁劲松,翟毓秀,谭志军,郭萌萌
国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071)
摘要:建立了水产品中15种喹诺酮类药物(QNs)残留量的高效液相色谱串联质谱
(HPLG-MS/MS)测定方法。以氘代试剂为内标,样品经酸性乙腈萃取后,用正己烷脱
脂,旋转落发浓缩,采用HPI.CMS/MS选择反应监测(SRM)正离子模式测定,
内标法定量。可同时对水产品中的15种QNs进行定性和定量测定。15种QNs的检出限
(S/N=3)为1.0g/kg,定量限(S/N=10)为2.0g/kg;在10.0-200.0ng/mL时峰
强度与质量浓度的线性关系良好(r>0.99)。方法的平均回收率范固为66%~121%
该法简便快捷,分析成本低,在一定程度上实现了药物残留的快速检测
关键词:高效液相色谱串联质谱:内标法:水产品;喹诺酮类药物;多残留同时测定
中图分类号:0657.63
文献标识码
喹诺类抗菌药( Ouino lones,QNs)是指人:合成的一类抗菌药物。自上世纪80年代起,在水产养
殖业上有非常广泛的应用,然而过量使用这些抗菌剂会导致水产品中有药物残留,影响人类的健。研究
表明,QNs会对中枢神经系统造成不良反应,可致症肌无力症状加亜、呼吸肌无力而危及生命,H有潜
在的致癌性和遗传毒性。同吋动物性食品屮残留铰低浓度的QNs容易诱导人类的病原微生物对QNs产
牛耐药性,从而可能导致人类医药资源的丧失。QNs的残留问题己引起广泛的关注,我国以及世界卫生.
组织、欧盟、关困、日本等家和纽织都将喹诺酮类药物列入限制使用的兽药药物名单中,并制订出相关
的最残留限量(MRI)。
目前,QNs的检测方法有微生物抑制法、液相色谱法和液相色谱质谱法等。H于水产品的蛋
白质及脂肪含量高、基质复杂等原,采用液相色谱法测定灵敘度低。高效液相色巾联质谱法(HPI-C-
MS/MS)只有选择性、灵敏度高和·次可检测多种喹诺制类药物残留的优点,在喹诺制类药物的确证分
析中应用较多。供前人多数报道檢测QNs的方法采用外标法定量,对样品的提収要求较高,?收率很
难达到满意的结果。内标法能有效校正样品提取、浄化等过程中QNs的损失和基质效应所引起的定量误
差。本实验建立了用3种氘代QNs作内标,采用HPLC-MS/MS同时测定水产品中15种QNs残留的快
速檢测方法,并对提収条件,液相色谱、质谱条件等进行优化。该方法出限低,軍现性好,抗干扰能力强,
结果准确,能满足水产品等出?的质量控制
1实验部分
1.1仪器与试剂
Thermo Finnigan T$QQ uantum A ccess i液相色谱高分辨屮联四极枓质谱联川仪,配有FSI源。超
卢波清洗仪,离心机,旋转蒸发仪,旋涡振荡器。
收稿日期:20090723
修回日期:20091230
基金项目:国家863计划(No.2008AA100805;仪业部行业专项 N vhy Zx I070460;基本科研业务費(2007g-02)
通讯作者:冷凯使,男,副研究员,主要从事水产品质量檢验研究
O1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp://www
第4期
王志杰等:高效液相色谱串联质谱内标法同时测定水产品中15种喹酮类药物残留量
第26卷
QNs标注品及内标均购白德国 Winema公司(纯度>99.5%)。标准储备溶液:分別称収近量各种
QNs标准品,用?痺溶解(对于不溶解的诺硐类标准品,可添加少量甲酸使其溶解)并定容,配成1.0
mg/mL的标准储备液,于-18て下避光保存,可使げ6个月。混标使用液:准确吸取各QNs标准储备浴
液,用甲晫逐级稀释,配成1.0lg/mL.和0.1Hg/mL.混合溶液,避光4℃冷臧保存,保存期为1个月。内
标储帑溶液:分称取适量的内标标准品,川甲(需加少量甲胶使其浴解)溶解并定谷,配成0.5mg/ml
的标准储备液,-18Cド避光保存.可使用6个月。泥合内标使用液:准确败取各内标储备液,用卬醇逐级
稀释,配成1.01g/mL的混合内标使用液,4℃下避光保存,可使用1个月。乙脂、甲醇、甲酸、乙酸铵均为
色谱纯:硫酸为分析纰:0.1%甲酸溶液(含5.0 mmol/I.乙酸铵);酸化乙腈:99ml.乙腈中加入1ml.甲
酸。试验用水符合CB/T6682·级水指标。
1.2分析条件
1.2.1色谱条件色谱柱为C18柱(可米川MG,150×2.1mm,5um或相当者)(资生堂);进样量:10
HL;柱混:至混。流劲相A为0.1%屮酸溶液(含5.0 mmol/L乙酸铵),B为中醇,C为と腊。梯度洗脱条
什见表
表1梯度洗脱条件
Table I The co ndition of gradient el ution
Time( min)
Flow rate(以I.min)
C
75
8.0
78
16
200
78
20
1.2.2质谱条件离子化模式:大气压电雾离子源ESI),正离子模式:务电压:4500V;的气述力
12T/mim;辅助气流量:2./min;离子传输管温度:350C:源内碰撞诱导解离电压:6V:扫描模式:选择反
应监测(SRM),选择反应监測母离了、了离了和碰撞能量见表2:Q1半峰宽:0.7Da:Q3半峰宽:0.7Da
術气压力:气、1.5 MT ORT15种QNs的质谱条件见表
表215种QNs的质谱条件
Ta be 2 EST MSM S conditions for 15 ONS
Analyte
Parcnt ion Daug ht er ion Collision cnergy
Parent ion Daughter ion Collision energy
Analyte
Flerox acin 370
269
Diflo xacin
400
299
28
326
356
XaC⊥
362
Saraflo xacir
386
299
orfox acin
320
Sparflox acin 39
Fno xacin
321
Oxolinic acid 262
16
Cipro flox acin 332
Flumequin
262
202
288
Enroflox aci
360
上 eflox ae
316
I omeflo xacin 352
307
308
Dano flo xacin 358
283
proflox acim D8 340
Orbi
396
Enrofloxacir D5 365
17
展开阅读全文