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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T2124-2008
大西洋鲑鱼三代虫检疫技术规范
Protocol of quarantine for Gyrodactylosis of
Atlantic salmon (Gyrodact ylus salaris
2008-09-04发布
2009-03-16实施
中华人
共和国
国家质量監督检验检疫总局发布
SN/T2124--2008
本标准修改采用了国际曾疫局((IE)《水生动物疾病诊断手册》(2006版)的第2.1.14章
木标准与《水生动物疾病诊断手册》(2006版)的第2.1.14章相比,主要差如下
对聚合酶链式反应和扩増产物的电泳过程进行了优化;
重新编排了格式
本标准的附录B是规范性附录,附录A、附录C、附录D、附录E、附录F、附录G是资料性附录
本标准山国家认证认可监督管理委员会提出并归口
本标准起草单位:中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检
疫局
木标准主要起草人:刘荭、邱杨、江育林、史秀杰、何俊强、高降英、叶奕优
本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准
SN/T2124-2008
大西洋鲑鱼三代虫检疫技术规范
范围
本标准规定了大西洋鲑鱼三代虫显微镜检和聚合晦链反应(PCR)检测方法。
木标准适用于大西洋鲑伯三代虫的检疫。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有
的修改単(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究
足否可使用这些文件的最新版本。凡足不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T6682分析实验空用水规格和试验方法(GB/T6682-2008,ISO3696:1987,MOD)
概述
大西洋鮭伯三代虫简介参见附录A。
试剂和材料
4.1水:符合GB/T682中一级水的规格。
4.2甲醛:分析纯。
4.3乙醇:分析纯。
4.4Taq海:-20℃保存,不要反复冻融或温度刚烈变化。
4.5 DNTPS:含dCTP、dGTP、dATP、dTTP各10mmoL-/L。
4.6引物:浓度为40amol/L。其序列如下
ITS-1.5,-TTT CCG TAG GTG AAC CT-33
ITS-2:5, CC GCT TAG TGA TA-3
扩增内部转录间隔区(ITS)中的1300bpP片段,退火温度为50℃
IGS-1.5-CTTG GCTATA TAA GACTGC-3
IGS-2. 5,-AAG ATA CTC ATT TGA CTC GGTGGTG-3
扩增基因间隔区(1GS)中的738bp的片段,退火温度为55℃。
LA.5'-TAA-TCG-GCG-GGT-TCG-GTA-A-3
HA,-GAA-CCA-TGT-ATC-GTG-TAG-CA-33
扩増线粒体细胞色索氧化酶Ⅰ基因中的893bp的片段,退火温度为50て
4.7?丙醇:分析纯,使用前预冷到一20℃C。
4.8矿物油:要求尢DNA酶和RNA酶,用于无热盖的PCR扩増仪。
4.9相对分子质量标准。
4.10其他试剂见附录B。
5器材和设备
5.1解剖镜。
5.2水浴锅。
5.3恒温箱。
SN/T2124--2008
5.4普通冰箱和超低混冰箱
5.5台式离心机。
5.6PCR扩増仪。
5.7水平电泳仪。
5.8微量移液器
5.9紫外观察灯或凝胶成像仪。
5.10制冰机。
5.11显微镜
6大西洋鲑鱼三代虫的检查和固定
6.1大西洋鲑鱼三代虫的检查
检査时,将伯放在盛有运输时所用水的容器中,将伯完全淹没。用针刺伯脑,将伯杀死,以免位血污
染水。将鱼放在具有良好光线的双筒解剖鏡下逐条检杳,检査鱼的体表,包括鰓和口腟。
在缺乏活鱼检查的条件下,用10%甲醛或85%乙醇溶液固定鱼体。用甲醛固定的鱼,三代虫标木
旱白色:用乙醇固定的鱼,三代虫呈轻微的啼黄色。检査前将装有鱼的容器放在自来水龙头下,让水流
轻轻地通过容器冲洗约2h。在冲洗之前,先要分別检査固定鱼所用的固定剂,包括容器底部的沉淀
物,看在固定和运输的过程中有无三代虫从鱼的身体上掉下来。
6.2大西洋鲑鱼三代虫的固定
先加一滴水到载玻片上,然后将一条寄生虫放到水滴上,轻轻地盖上盖玻片,用一块滤纸在盖玻片
的边缘慢慢吸水,直到水基本吸干为止。注意水不要吸得太干,以免压碎虫体。接着消一小滴APG(见
附录B第B.1章)到盖玻片的边缘,直至APG溶液浸满盖玻片与载玻片之间的空隙
在玻片上:做好标签,标签上要注明宿主种类、虫体的寄生部位、采集地点、采集日期和水温。
7大西洋鲑鱼三代虫的形态学鉴定
大西洋鲒鱼三代虫的形态测量及形窓学描述见表1,并参见附录C和附录D。虫体来自鲱的幼鱼
和虹鳟,进行虫体测量时的水温在0℃~20℃之间
表1大西洋鲑鱼三代虫的边缘小钩、锚钩和腹联结棒中14种特征数据的总变动范围
测量的特征
变动范围/pm
边缘小钩全长
边缘小钩柄部长
26,0~38.5
边缘小钩镰部长
7.0~-9.5
锚钩全长
58.0~~85.0
锚钩柄部长
42,8-63.9
锚钩尖部长
27,8~44.2
销钩基部长
15,0~32.1
腹联结棒肭凸起问的最大长度
18,5~3.2
腹联结棒长
19,5~~32.0
腹联结棒鄗总笕度
联结棒棊部笕度
7.1--18.7
腹联结棒中闸总宽度
17.0
腹联棒间宽度
5.0~15.5
腹联结棒膜长
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