奶牛孕酮酶联免疫检测试剂盒的研制.pdf

广西农业科学2010,41(4):386-389
Guangxi Agricultural Sciences
奶牛孕酮酶联免疫检测试剂盒的研制
庞观龙,何达崇2,温和心2
(1广西农业职业技术学院,南宁530002广西科学院生物研究所,南宁53000)
摘要:为了掌握母牛孕酮水平变化信息,为发情鉴定、妊娠鉴别和卵巢疾病诊断提供参考依据,根据EISA基本原
理,研制了奶牛孕關 ELISA检测试剂盒。结果表明,采用孕酮-牛血清白蛋白(P-BSA)交联物解决了在酶标板上包被
抗原的问题,且抗原容易保存;而利用孕酮-卵清白蛋白(P-0VA)交联物免疫兔子获得高效价抗体,能阻断1ngmL孕
水平;并以 ELISAT棋盘测定法确定P-BSA2000倍、血清500倍稀释为该试剂盒最佳工作浓度。该试剂盒以牛粪作为
检测样品,即通过粪便中的孕水平变化可为奶牛发情鉴定、妊娠鉴别、殖障碍性疾病诊断提供可靠的技术支撑。
关键词:奶牛;孕酮;酶联免疫吸附测定法;抗体效价
中阳分类号:S854.43
文献标识码:A
文章编号:1002-8161(2010)04-0386-04
Preparation of enzyme linked immunosorbent assay kit for milk
cow progesterone
PANG Guan-long, HE Da-chong, WEN He-xin?
(1 Guangxi Vocational Technical College of Agriculture, Nanning 530007, China; 2 Biology Institute, Guangxi Academy
of Sciences, Nanning 530003, China)
Abstract: In order to investigate the change in progesterone level of cow to provide reference on heat and gestation
period identification, and ovary disease diagnosis, the enzyme linked immunosorbent assay kit(ELISA) or cow progesterone
was prepared based on primary mechanism of ELISA. The results showed that applying progesterone bovine serum
albumin (P A)Cross-linking polymer could solve the problem of enveloping antigen on ELISA plate, and antigen was
easy to be conserved. It was found that high titer antibody could be obtained by applying progesterone-ovalbumi (P -OVA)
cross-linking polymer o immunize the abit and it ould lock 1 n ml progesterone. The 2000 and 500 dilution times for P,
BSA and serum were found to be the optimal concentration of kit by ELISA chessboard method. The cow dung was used for
detecting sample with kit, and the change in progesterone level of dung could provide reference on heat and gestation
period identification, and diagnosis of reproduction barrier disease
Key words: cow; progesterone; ELISA; antibody titer
雌性动物性周期中孕酮水平呈规律性变化,发有快速、灵敏、简便等优点,目前已被广泛应用于多
情期孕酮水平最低,黄体期孕酮水平较高,妊娠期种细菌、病毒疾病的诊断2。本研究根据ELSA基
孕酮水平则一直维持在较高水平上,即孕閘水平与本原理,研制奶牛孕酮 ELISA检测试剂盒,旨在获得
发情周期、妊娠等高度相关。在囃性动物血液、乳汁母牛孕酮水平变化信息,为发情鉴定、妊娠鉴别和
及粪便中均含有微量的孕酮,一般化学方法无法检卵巢疾病诊断提供参考依据。
测。传统的孕酮检测方法是采用放射免疫方法
(RIA),该方法具有较高灵敏度,但测定费时、所
1材料与方法
需设备特殊、价格昂贵,且放射物处理不好还会污1,1主要试剂及仪器
染环境,因此,不适宜在生产中推广使用。酶联免疫
主要试剂有孕酮标准品(购自 Sigma公司)、羟
吸附测定法(ELSA)是将已知的抗原或抗体吸附在基孕剛、牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、
固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表二环已基碳化二亚胺(DCC)、甲醇、弗氏完全/不完
面进行,利用抗原抗体反应的高度特异性和酶促反全佐剂、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔酶标二抗、
应的信号放大作用检测大分子抗原或抗体,因其具TYMB、过氧化氢以及N,Nーニ甲基乙酰胺。包被液为
收稿日期:2010-02-09
基金项目:广西南然科学基金项目(桂科基0575028)
作者简介:庞观龙(1962-),男,广西陆川人,讲师,主要从事兽医免疫学研究工作。
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