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类型SBT 10463-2008 猪肺炎支原体检验方法.pdf

  • 上传人:顾俊杰
  • 文档编号:16068145
  • 上传时间:2017-06-17
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  • 页数:8
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    关 键  词:
    SBT 10463-2008 猪肺炎支原体检验方法 10463 2008 肺炎 支原体 检验 方法
    资源描述:
    ICS11.220
    备案号:24730-2008
    中华人民共和国国内贸易行业标准
    SB/T10463-2008
    猪肺炎支原体检验方法
    Methods for the detection of mycoplasmal pneumonia of swine
    2008-07-03发布
    2008-12-01实施
    中华人民共和国商务部发布
    SB/T10463~2008
    前言
    本标准的附录A为规范性附录。
    本标准由中华人民共和国商务部提出并归口。
    本标准由中华人民共和国商务部屠宰技术鉴定中心负责起草。
    本标准主要起草人:赵志云、金社胜、郑志明
    SB/T10463-2008
    猪肺炎支原体检验方法
    1范围
    本标准规定了猪支原体肺炎的检验方法
    本标准适用于生猪屠宰过程中猪支原体肺炎的实验室检验。
    2规范性引用文件
    下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有
    的修改单(不包括劫误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究
    是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
    GB/T4789.28-2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
    3术语和定义
    下列术语和定义适用于本标准
    猪支原体肺炎 mycoplasmal pneumonia of swine
    由猪肺炎支原体( Myco plasma hyo pneumoniae)感染引起猪的一种接触性传染病。以气喘和咳嗽、
    患猪长期生长缓慢发育不良、肺门淋巴结呈髓样肿胀,淋巴组织显著增生为特征
    4设备和树料
    4.1过滤器:300nn孔径。
    4.2剪刀、慑子。
    4.3雊形瓶:1000mL。
    4.4均质器或灭菌乳钵
    4.5注射器:1mL(具0.1mL刻度)、5mL(具0.1mL刻度)。
    4.6量筒:250mL
    4.7平阻:直径90mm。
    4.8试管:16mm×160mm
    4.9吸管:10mL(具0.1mL刻度)。
    4.10滤纸、漏斗、纱布、棉花、玻璃棒、胶塞
    注:以上试验器材,在试验前应灭菌处理。
    4.11生化培养箱:36℃土1℃
    4.12恒温水浴箱。
    4.13高压灭菌器。
    4.14厌氧罐:《厌氧培养箱)
    4.15载玻片。
    4.16酒精灯
    4.17电子天平:感量0.1g。
    4.18光学显微镜:物镜10X~100
    4.19pH试纸、接种环等
    SB/T10463-2008
    5培养基和试剂
    5.1姬姆萨氏染色液(见附录A)。
    5.2瑞氏染色按GB/T4789.28-2003中2.6的方法进行。
    5.3伊红美蓝染色(见附录A)。
    5.4 Goodwin氏等复合液体培养基(见附录A)。
    5.5 Goodwin氏等复合固体培养基(见附录A)。
    5.6Hank's液(见附录A)。
    6检验程序
    病理组织
    病理学检查
    分离培养
    肉眼检查组
    组织蝕片、
    液体培养
    固体培养
    织病变
    姫姆萨氏染色
    结果判断
    显徹镜观察
    姬婚萨氏染色
    结果判断
    显镜观察
    结果判断
    图1猪肺炎支原体检验程序
    7检验用病料
    肺脏、肺门淋巴结
    8检验步骤
    8.1病理学检查
    8.1.1肉眼检查
    肺的病变部位主要见于心叶、尖叶、中间叶及膈叶的前缘。常呈间质性肺炎病变,两侧肺病变大致
    对称。病变部界限明显,质地坚实,呈胶样浸润半透明状态。切面湿润、平滑,像嫩肉样(即“肉变”)。严
    重的病例病变部颜色加深,昰淡紫红色、深紫色或灰白色、灰红色,至后期半透明状态减轻,坚韧度增加,
    似胰脏组织(即“胰变”)。
    肺门和纵膈淋巴结肿大,呈灰白色、水肿。切面湿润稍外翻,边缘有时可见轻度充血。
    8.1.2触片及染色
    检验样品制成触片,自然于燥,用甲醇固定2min~5min,再以pH7.2的磷酸盐缓冲液稀释20倍
    的姬姆萨氏染色液染色3h,水洗后立即用丙酮浸染一次,然后镜检。
    SB/T10463-2008
    8.1.3镜检
    猪肺炎支原体呈紫红色,多数在细胞外,偶见在嗜中性白细胞的胞浆内。呈球状、环状、椭圆形或两
    极形、直杆或弯杆状,单个或群集
    8.2分离培养
    8.2.1分离
    将病肺组织用Hank's液洗去血液和组织碎片,取病肺258加入到225 ML Goodwin等氏复合液
    体培养基中,用均质器8000r/min~-10000r/min均质1min,或用乳缽加灭菌砂磨碎。用灭菌过滤器
    过滤,去除杂质。
    8.2.2培养
    移取10mL滤液转种于100 ML Goodwin等氏复合液体培养基中,置厌氧罐(或厌氧培养箱)中
    37℃土1℃、含5%~10%CO2条件下,培养3d~7d,观察其产酸和浊度情况,培养基由红变黄,呈轻
    微泥浊。
    取培养液划线接种于 Goodwin等氏固体培养基平板,置厌氧饿(或厌氧培养箱)中37℃土1℃,培
    养,在固体培养基上生长缓慢,接种培养7d~10d,观察可见圆形隆起,边缘整齐,表面粗糙,中央有颗
    粒的针尖大小或露珠状小菌落。
    染色
    8.2.3.1取液体培养物涂片,自然干燥后火焰固定,姬姆萨氏染色
    8.2.3.2取固体培养物涂片,自然干燥后火焰固定,姬姆萨氏染色。
    镜检
    8.2.5结果判定
    镜下所见:因本菌无细胞壁,为多形态微生物,有环状、丝状、点状、杆状和两极状等。液体培养物涂
    片,菌体为蓝色、两极浓染的短杆状或逗点状,轮廓清晰。固体培养物涂片,菌体为多形性、环状等等,即
    可判定为猪肺炎支原体菌体。
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