SBT 10463-2008 猪肺炎支原体检验方法.pdf

ICS11.220
备案号:24730-2008
中华人民共和国国内贸易行业标准
SB/T10463-2008
猪肺炎支原体检验方法
Methods for the detection of mycoplasmal pneumonia of swine
2008-07-03发布
2008-12-01实施
中华人民共和国商务部发布
SB/T10463~2008
前言
本标准的附录A为规范性附录。
本标准由中华人民共和国商务部提出并归口。
本标准由中华人民共和国商务部屠宰技术鉴定中心负责起草。
本标准主要起草人:赵志云、金社胜、郑志明
SB/T10463-2008
猪肺炎支原体检验方法
1范围
本标准规定了猪支原体肺炎的检验方法
本标准适用于生猪屠宰过程中猪支原体肺炎的实验室检验。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有
的修改单(不包括劫误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T4789.28-2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准
猪支原体肺炎 mycoplasmal pneumonia of swine
由猪肺炎支原体( Myco plasma hyo pneumoniae)感染引起猪的一种接触性传染病。以气喘和咳嗽、
患猪长期生长缓慢发育不良、肺门淋巴结呈髓样肿胀,淋巴组织显著增生为特征
4设备和树料
4.1过滤器:300nn孔径。
4.2剪刀、慑子。
4.3雊形瓶:1000mL。
4.4均质器或灭菌乳钵
4.5注射器:1mL(具0.1mL刻度)、5mL(具0.1mL刻度)。
4.6量筒:250mL
4.7平阻:直径90mm。
4.8试管:16mm×160mm
4.9吸管:10mL(具0.1mL刻度)。
4.10滤纸、漏斗、纱布、棉花、玻璃棒、胶塞
注:以上试验器材,在试验前应灭菌处理。
4.11生化培养箱:36℃土1℃
4.12恒温水浴箱。
4.13高压灭菌器。
4.14厌氧罐:《厌氧培养箱)
4.15载玻片。
4.16酒精灯
4.17电子天平:感量0.1g。
4.18光学显微镜:物镜10X~100
4.19pH试纸、接种环等
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5培养基和试剂
5.1姬姆萨氏染色液(见附录A)。
5.2瑞氏染色按GB/T4789.28-2003中2.6的方法进行。
5.3伊红美蓝染色(见附录A)。
5.4 Goodwin氏等复合液体培养基(见附录A)。
5.5 Goodwin氏等复合固体培养基(见附录A)。
5.6Hank's液(见附录A)。
6检验程序
病理组织
病理学检查
分离培养
肉眼检查组
组织蝕片、
液体培养
固体培养
织病变
姫姆萨氏染色
结果判断
显徹镜观察
姬婚萨氏染色
结果判断
显镜观察
结果判断
图1猪肺炎支原体检验程序
7检验用病料
肺脏、肺门淋巴结
8检验步骤
8.1病理学检查
8.1.1肉眼检查
肺的病变部位主要见于心叶、尖叶、中间叶及膈叶的前缘。常呈间质性肺炎病变,两侧肺病变大致
对称。病变部界限明显,质地坚实,呈胶样浸润半透明状态。切面湿润、平滑,像嫩肉样(即“肉变”)。严
重的病例病变部颜色加深,昰淡紫红色、深紫色或灰白色、灰红色,至后期半透明状态减轻,坚韧度增加,
似胰脏组织(即“胰变”)。
肺门和纵膈淋巴结肿大,呈灰白色、水肿。切面湿润稍外翻,边缘有时可见轻度充血。
8.1.2触片及染色
检验样品制成触片,自然于燥,用甲醇固定2min~5min,再以pH7.2的磷酸盐缓冲液稀释20倍
的姬姆萨氏染色液染色3h,水洗后立即用丙酮浸染一次,然后镜检。
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8.1.3镜检
猪肺炎支原体呈紫红色,多数在细胞外,偶见在嗜中性白细胞的胞浆内。呈球状、环状、椭圆形或两
极形、直杆或弯杆状,单个或群集
8.2分离培养
8.2.1分离
将病肺组织用Hank's液洗去血液和组织碎片,取病肺258加入到225 ML Goodwin等氏复合液
体培养基中,用均质器8000r/min~-10000r/min均质1min,或用乳缽加灭菌砂磨碎。用灭菌过滤器
过滤,去除杂质。
8.2.2培养
移取10mL滤液转种于100 ML Goodwin等氏复合液体培养基中,置厌氧罐(或厌氧培养箱)中
37℃土1℃、含5%~10%CO2条件下,培养3d~7d,观察其产酸和浊度情况,培养基由红变黄,呈轻
微泥浊。
取培养液划线接种于 Goodwin等氏固体培养基平板,置厌氧饿(或厌氧培养箱)中37℃土1℃,培
养,在固体培养基上生长缓慢,接种培养7d~10d,观察可见圆形隆起,边缘整齐,表面粗糙,中央有颗
粒的针尖大小或露珠状小菌落。
染色
8.2.3.1取液体培养物涂片,自然干燥后火焰固定,姬姆萨氏染色
8.2.3.2取固体培养物涂片,自然干燥后火焰固定,姬姆萨氏染色。
镜检
8.2.5结果判定
镜下所见:因本菌无细胞壁,为多形态微生物,有环状、丝状、点状、杆状和两极状等。液体培养物涂
片,菌体为蓝色、两极浓染的短杆状或逗点状,轮廓清晰。固体培养物涂片,菌体为多形性、环状等等,即
可判定为猪肺炎支原体菌体。