【发明专利】丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠的检测方法 CN106556649A.pdf

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510638593.9(22)申请日 2015.09.30G01N 30/02(2006.01)(71)申请人 天津康鸿医药科技发展有限公司地址 300193 天津市南开区鞍山西道 308 号(72)发明人 王彦竹 刘钫 王杏林 孙歆慧宋丽明 邹美香(74)专利代理机构 北京泛华伟业知识产权代理有限公司 11280代理人 郭广迅(54) 发明名称丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠的检测方法(57) 摘要本发明提供了一种 HPLC 法检测丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠用的供试品的制备方法， 所述方法包括以下步骤 ： 在丁酸氯维地平注射乳剂中加入异丙醇和正己烷的混合液并振摇，然后离心并取水相， 加入能够络合依地酸的金属离子盐溶液形成络合物， 形成供试品溶液。 本发明还提供了一种检测丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠的方法， 所述方法为 HPLC 法， 本申请的发明人发现， 通过将丁酸氯维地平注射乳剂中的油水两相进行有效分离， 可以使溶解在水相中的依地酸二钠得到准确的测定， 本发明方法检测灵敏度高， 精密度好， 专属性强， 是严格控制丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠含量的有效方法。(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书2页 说明书8页 附图1页CN 106556649 A2017.04.05CN 106556649 A 1/2 页21.一种 HPLC 法检测丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠用的供试品的制备方法， 其特征在于， 所述方法包括以下步骤 ：在丁酸氯维地平注射乳剂中加入异丙醇和正己烷的混合液并振摇， 然后离心并取水相， 加入能够络合依地酸的金属离子盐溶液以形成络合物， 从而形成供试品溶液 ；其中， 所述混合液中异丙醇与正己烷的体积比为 7:3-9:1， 优选为 8:2 ； 所述混合液与所述丁酸氯维地平注射乳剂的体积比为 2:1-1:2， 优选为 1:1 ；优选地， 所述金属离子为Fe3+或Cu2+， 更优选地， 所述Cu2+的浓度为5-16mmoL/L， 更优选为 13mmoL/L ；优选地， 所述金属离子盐溶液为 Cu(NO3)2溶液、 FeCL3溶液或 CuSO4溶液。2.根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述方法还包括下述步骤 ：加入异丙醇和正己烷的混合液并振摇后， 加入正己烷并振摇 ； 优选地， 所述正己烷的与所述丁酸氯维地平注射乳剂的体积比为 2:1-5:1， 更优选地为 2.5:1。3.根据权利要求1或2所述的方法， 其特征在于， 所述方法还包括将所述供试品溶液加水稀释的步骤。4.一种检测丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠含量的方法， 其特征在于， 所述方法采用 HPLC 法来进行 ；其中， 所述 HPLC 的色谱条件如下 ：色谱柱 ： 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱 ；流动相 ： 分别由有机相与水相组成的 A 相与 B 相 ；其中 ： A 相为体积比为 5:1-2:1， 优选地为 4:1 的氢氧化四丁基铵缓冲液 - 乙腈， B 相为体积比为 10:1-7:1， 优选地为 9:1 的甲醇 - 水 ；检测波长 ： 250-260nm， 优选为 254nm ；进样量 ： 20-100L， 优选为 50L ；流速 ： 0.9-1.1mL/min， 优选为 1.0mL/min ；柱温为 33-38， 优选 35 ；所述 HPLC 法通过包括以下步骤的方法制备样品 ：1) 制备供试品溶液 ： 按照权利要求 1-3 中任一项所述的方法制备供试品溶液 ；2) 制备对照品溶液 ： 取依地酸二钠对照品， 加到不含依地酸二钠的空白丁酸氯维地平注射乳剂中， 制备依地酸二钠的浓度为 8-90gmL-1的丁酸氯维地平注射乳剂， 然后按照制备供试品溶液的步骤制备对照品溶液。5.根据权利要求 4 所述的方法， 其特征在于， 所述对照品溶液中依地酸二钠的浓度为8-90gmL-1； 优选为 40-60gmL-1； 更优选为 50gmL-1。6.根据权利要求4或5所述的方法， 其特征在于， 所述氢氧化四丁基铵缓冲液的浓度为19mmoL/L-27mmoL/L， 优选为 25mmoL/L ；所述氢氧化四丁基铵缓冲液的 pH 值为 6.0-7.0， 优选为 6.4 ； 更优选地， 所述氢氧化四丁基铵缓冲液的 pH 值使用磷酸调节 ；优选地， 所述氢氧化四丁基铵缓冲液使用水膜过滤 ； 更优选地， 所述水膜的孔径为0.45m。7.根据权利要求 4-6 中任一项所述的方法， 其特征在于， 所述 25mmoL/L 的氢氧化四丁权 利 要 求 书CN 106556649 A2 2/2 页3基铵缓冲液可以按照如下方法制备 ： 量取 26.4mL 0.964moL/L 的氢氧化四丁基铵试液， 加水稀释至 1000mL， 用磷酸调 pH 值至 6.4， 用 0.45m 滤膜过滤， 既得。8.根据权利要求 4-7 中任一项所述的方法， 其特征在于， 所述 HPLC 的梯度洗脱条件如下 ：权 利 要 求 书CN 106556649 A3 1/8 页4丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠的检测方法技术领域0001 本发明属于药物分析领域， 具体涉及丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠的检测方法背景技术0002 丁酸氯维地平注射乳剂是英国阿斯利康开发的第 3 代新型短效二氢吡啶类钙通道阻滞剂， 目前国内尚无上市品， 为了提高注射乳剂的稳定性和安全性， 常在制剂中加入适量依地酸二钠 (EDTA-2Na) 作为络合剂和抗氧剂。临床研究证实， 依地酸二钠可与 Ca2+形成水溶性较好的金属螯合物， 大剂量使用或静注过快易导致骨钙流失或低血钙， 因此对丁酸氯维地注射乳剂中依地酸二钠含量进行监测显得十分重要。 通常认为注射乳剂中EDTA-2Na安全有效浓度为 0.005-0.1mgmL-1。0003 目前， 中国药典收载了 EDTA-2Na 的含量测定方法 ： 取本品 0.4g， 精密称定， 加水约40mL使溶解， 加氨氯化铵缓冲液(pH10.0)10mL， 以锌滴定液(0.05moL/L)滴定， 近终点时加少量铬黑 T 指示剂， 继续滴定至溶液由蓝色变成紫红色。该方法测定 EDTA-2Na 时， 溶液中EDTA-2Na 的浓度要达到 10mgmL-1， 无法实现对微量 EDTA-2Na 的质量控制。0004 因此， 现有技术中需要一种专属性强、 快速、 简便的丁酸氯维地平注射乳剂中微量依地酸二钠的检测方法， 用以保证药物质量的可控性， 从而确保用药安全。发明内容0005 基于此， 本发明人提供了一种简便、 快速、 准确的检测方法， 用于检测丁酸氯维地平注射乳剂中所含的微量辅料依地酸二钠， 并测定其含量。0006 本发明所述的依地酸二钠为乙二胺四乙酸二钠水合物， 分子式为 C10H14N2Na2O82H2O。0007 为实现上述目的， 本发明采取了以下技术方案 ：0008 一方面， 本发明提供了一种 HPLC 法检测丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠用的供试品的制备方法， 其特征在于， 所述方法包括以下步骤 ：0009 在丁酸氯维地平注射乳剂中加入异丙醇和正己烷的混合液振摇， 然后离心并取水相， 加入能够络合依地酸的金属离子盐溶液以形成络合物， 从而形成供试品溶液 ；0010 其中， 所述混合液中异丙醇与正己烷的体积比为 7:3-9:1， 优选为 8:2 ； 所述异丙醇和正己烷的混合液与所述丁酸氯维地平注射乳剂的体积比为 2:1-1:2， 优选为 1:1。0011 优选地， 所述金属离子为碱金属离子或重金属离子， 所述金属离子与 EDTA 的络合稳定常数大于 10， 更优选地所述金属离子为 Fe3+或 Cu2+， 进一步优选地， 所述 Cu2+的浓度为5-16mmoL/L， 优选为13mmoL/L ； 优选地， 所述金属离子盐溶液为Cu(NO3)2溶液、 FeCL3溶液或CuSO4溶液。0012 在一个优选的实施方案中， 根据本发明制备供试品的方法还包括下述步骤 ： 加入异丙醇和正己烷的混合液并振摇之后， 再加入正己烷并振摇 ； 优选地， 所述正己烷与所述丁说 明 书CN 106556649 A4 2/8 页5酸氯维地平注射乳剂的体积比为 2:1-5:1， 更优选地为 2.5:1。优选地， 所述供试品溶液还可以加水稀释。0013 一种检测丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠含量的方法， 其特征在于， 所述方法采用 HPLC 法来进行 ；0014 其中， 所述 HPLC 的色谱条件如下 ：0015 色谱柱 ： 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱 ；0016 流动相 ： 分别由有机相与水相组成的 A 相与 B 相 ；0017 其中 ： A 相为体积比为 5:1-2:1， 优选地为 4:1 的氢氧化四丁基铵缓冲液 - 乙腈， B相为体积比为 10:1-7:1， 优选地为 9:1 的甲醇 - 水 ；0018 检测波长 ： 250-260nm， 优选为 254nm ；0019 进样量 ： 20-100L， 优选为 50L ；0020 流速 ： 0.9-1.1mL/min， 优选为 1.0mL/min ；0021 柱温为 33-38， 优选 35 ；0022 所述 HPLC 法通过包括以下步骤的方法制备样品 ：0023 1) 制备供试品溶液， 按照本申请所述的方法制备供试品溶液 ；0024 2) 制备对照品溶液， 取依地酸二钠对照品， 加到不含依地酸二钠的空白丁酸氯维地平注射乳剂中， 得到依地酸二钠的浓度为 8-90gmL-1的丁酸氯维地平注射乳剂， 然后按照本发明的制备供试品溶液的步骤制备对照品溶液 ； 优选地， 所述对照品溶液中依地酸二钠的浓度为 8-90gmL-1； 更优选为 40-60gmL-1； 进一步优选为 50gmL-1。0025 优选地， 所述氢氧化四丁基铵缓冲液的浓度为 19mmoL/L-27mmoL/L， 更优选地为25mmoL/L ；0026 优选地， 所述氢氧化四丁基铵缓冲液的 pH 值为 6.0-7.0， 更优选地为 6.4 ；0027 优选地， 所述氢氧化四丁基铵缓冲液的 pH 值使用磷酸调节 ；0028 优选地， 所述氢氧化四丁基铵缓冲液使用水膜过滤 ； 更优选地， 所述水膜的孔径为0.45m ；0029 优选地， 所述 HPLC 的梯度洗脱如表 1 所示， 所述的梯度洗脱条件为 ：0030 表 1 梯度洗脱条件0031 0032 理论板数按 EDTA-2Na 峰计算不低于 3000。0033 在一个优选的实施方案中， 所述 25mmoL/L 的氢氧化四丁基铵缓冲液可以按照如下方法制备 ： 量取 26.4mL0.964moL/L 的氢氧化四丁基铵试液， 加水稀释至 1000mL， 用磷酸调 pH 值至 6.4， 用 0.45m 滤膜过滤， 即得。其中， 所述 0.964moL/L 的氢氧化四丁基铵试液即为质量浓度为 25的氢氧化四丁基铵试液， 可以商购获得。说 明 书CN 106556649 A5 3/8 页60034 在一个优选的实施方案中， 所述样品通过以下方法处理 ：0035 (1) 供试品溶液制备 ：0036 精密量取丁酸氯维地平注射乳剂 10mL， 置 50mL 离心管中， 精密加入体积比为 8:2的异丙醇 ： 正己烷的混合液 10mL， 振摇 1min， 再加入 25mL 正己烷振摇 1min， 于 5000r min-1离心 10min， 精密量取下层水相， 置 10mL 量瓶中， 加入 1.0mL 13mmoL/L 的 Cu(NO3)2溶液， 加水至刻度， 制得供试品溶液。0037 (2) 对照品溶液制备 ：0038 取依地酸二钠对照品适量， 精密称定， 加水制成约 500g/mL 的溶液。精密量取该溶液 1mL， 置 50mL 离心管中， 加不含依地酸二钠的空白丁酸氯维地平注射乳剂 9mL， 混合均匀。精密加入体积比为 8: