【发明专利】4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备抗肝纤维化和抗肝癌药物中的应用 CN110339188A.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910773392.8(22)申请日 2019.08.21(71)申请人 中国医学科学院医药生物技术研究所地址 100050 北京市西城区天坛西里1号(72)发明人 何红伟陈明华牛伟晓张娜葛茂旭路振宁鲍云洋(74)专利代理机构 北京高沃律师事务所 11569代理人 赵晓琳(51)Int.Cl.A61K 31/351(2006.01)A61P 1/16(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备抗肝纤维化和抗肝癌药物中的应用(57)摘要本发明提供了4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备抗肝纤维化和抗肝癌药物中的应用， 属于抗肝纤维化和肝癌药物技术领域。 本发明发现4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮具有良好的抗肝纤维化活性和抑制肝癌细胞转移的活性， 能够用于制备抗肝纤维化药物和抗肝癌药物。 实施例结果显示，4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮可抑制 型胶原蛋白1启动子的活性， 降低肝星状细胞LX-2中COL1A1、 ACTA2等肝纤维化标志物的表达， 改善BDL大鼠肝脏组织病理结构以及肝纤维化程度，能够抑制肝癌细胞HepG2的转移。权利要求书1页 说明书9页 附图8页CN 110339188 A2019.10.18CN 110339188 A1.4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备抗肝纤维化药物和抗肝癌药物中的应用。2.4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮为有效成分与药学上可接受的载体组成的组合物在制备抗肝纤维化药物和抗肝癌药物中的应用。3.4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备肝纤维化和肝癌预防保健品中的应用。4.一种用于抗肝纤维化和抗肝癌的药物， 其特征在于， 所述药物的有效成分包括4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮的衍生物、 药学上可接受的盐、 溶剂化物、 代谢产物、 立体异构体、 互变异构体、 多晶型物、 药物前体。权利要求书1/1 页2CN 110339188 A24-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备抗肝纤维化和抗肝癌药物中的应用技术领域0001本发明涉及抗肝纤维化和肝癌药物技术领域， 特别涉及4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备抗肝纤维化和抗肝癌药物中的应用。背景技术0002慢性肝脏疾病是一类世界性的严重危害人类健康的疾病， 病毒感染(HBV HCV)、 毒物(黄曲霉素)、 酒精、 先天性代谢缺陷等多种因素都可以引起慢性肝病。 肝纤维化是继发于各种慢性因素引起的肝脏损伤和炎症后组织修复过程中的代偿反应， 肝纤维化的进一步发展会导致肝硬化、 肝功能衰竭和肝癌。 研究发现， 肝纤维化是一种可逆性病变， 如果能在这一阶段给予有效的治疗， 对慢性肝炎的治疗， 肝硬化及肝癌等严重致死性疾病的预防具有重要的意义。 近年来， 肝纤维化的临床治疗取得一些新进展， 但是目前中国仅批准上市了复方鳖甲软肝片和扶正化瘀胶囊等几种中成药， 可供选择的抗肝纤维化药物较少。0003肝癌是全世界发病率和死亡率均很高的癌症， 中国是全世界肝癌发病率最高的国家和地区之一。 手术是肝癌最常用的治疗手段， 但受到肿瘤大小、 位置及恶性程度等多种因素的影响， 且肝癌发现时一般已经发展至中晚期， 能够应用手术进行治疗的只有少数患者，对于不可手术切除的肝癌患者， 治疗选择非常有限， 预后极差。 索拉非尼作为一种新型激酶抑制剂， 可同时作用于肿瘤细胞和肿瘤血管， 作为突破性的肝癌靶向治疗药物， 其对肝癌患者的生存改善依然较为有限， 亟需开发新型的肝癌治疗策略。0004因此， 从肝纤维化到肝癌的演化过程中， 寻找能够同时抑制肝纤维化和肝癌的药物有可能对肝癌的预防与治疗有重要的意义。发明内容0005有鉴于此， 本发明目的在于提供一种4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备抗肝纤维化和抗肝癌药物中的应用。 本发明将4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮用于制备抗肝纤维化药物和抗肝癌药物， 具有良好的抗肝纤维化和抗肝癌活性。0006为了实现上述发明目的， 本发明提供了以下方案：0007本发明提供了4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备抗肝纤维化药物和抗肝癌药物中的应用。0008本发明提供了4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮为有效成分与药学上可接受的载体组成的组合物在制备抗肝纤维化药物和抗肝癌药物中的应用。0009本发明提供了4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备肝纤维化和肝癌预防保健品中的应用。0010本发明提供了一种用于抗肝纤维化和抗肝癌的药物， 所述药物的有效成分包括4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮的衍生物、 药学上可接受的盐、 溶剂化物、 代谢产物、 立体异构体、互变异构体、 多晶型物、 药物前体。说明书1/9 页3CN 110339188 A30011本发明提供了4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备抗肝纤维化药物中应用， 本发明发现4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮(CAS:2381-87-5)具有良好的抗肝纤维化活性和抑制肝癌细胞转移的活性， 能够用于制备抗肝纤维化药物和抗肝癌药物。 肝星状细胞是肝纤维化的细胞学基础， 肝星状细胞的激活会诱导COL1A1、 ACTA2、 TGFB1、 MMP2等肝纤维化标志物的表达， 导致肝脏大量的胶原沉积。 实施例结果显示， 4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮可抑制 型胶原蛋白 1启动子的活性， 降低LX-2细胞中COL1A1、 ACTA2等肝纤维化标志物的表达， 降低BDL大鼠血清中ALT， AST， ALP， TG， LDL水平、 改善BDL大鼠肝脏组织病理结构以及肝纤维化程度， 抑制大鼠肝脏组织中Col1a1、 Acta2、 Mmp2、 Tgfb1的mRNA表达。 此外， 4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮具有明显的抑制肝癌细胞的转移能力。 这些结果表明4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮具有良好的抗肝纤维化活性， 有望研发成为抗肝纤维化和抗肝癌的新药。附图说明0012图1是实施例1所得LX2细胞存活率柱状图；0013图2是实施例2中不同浓度的4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮对COL1A1启动子的活性抑制比示意图；0014图3是实施例3中COL1A1的mRNA的表达结果示意图；0015图4是实施例3中 -SMA的mRNA的表达结果示意图；0016图5是实施例3中4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮对目的基因蛋白表达水平影响的检测结果示意图；0017图6是实施例4中BDL手术后大鼠肝脏/体重比值图；0018图7是实施例4中BDL手术后大鼠体重变化图；0019图8是实施例4中BDL大鼠肝脏组织图；0020图9是实施例4中BDL大鼠肝脏病理切片图；0021图10是实施例4中大鼠肝脏胆管增生双盲评分图；0022图11是实施例4中大鼠肝脏组织坏死双盲评分图；0023图12是实施例4中大鼠肝脏组织切片天狼星红染色图； 其中， A)为sham组染色结果图， B)为BDL组染色结果图， C)为4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮处理组染色结果图， D)为各组染色面积百分含量示意图；0024图13是实施例4中肝纤维化标志物mRNA表达水平示意图； 其中， A为COL1A1的mRNA表达水平示意图， B为acta2的mRNA表达水平示意图， C为Mmp2的mRNA表达水平示意图， D为Tgfb1的mRNA表达水平示意图；0025图14是实施例5中肝癌细胞划痕实验结果图。具体实施方式0026本发明提供了4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备抗肝纤维化药物和抗肝癌药物中的应用。 本发明对所述4-甲基-5,6-二氢吡喃-2在制备抗肝纤维化药物和抗肝癌药物中的应用方式没有特殊的要求， 根据具体需要， 使用本领域技术人员熟知的方法将所述4-甲基-5,6-二氢吡喃-2制备成不同剂型的药物即可。 在本发明中， 所述4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮的有效浓度优选为3100 molL-1， 更优选为2080 molL-1。说明书2/9 页4CN 110339188 A40027本发明对所述4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮的来源没有特殊的要求， 使用市售的4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮或自行制备均可。 当需自行制备4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮时， 所述4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮的制备方法优选包括以下步骤：0028在催化剂的作用下， 使甲瓦龙酸内酯发生消去反应， 得到4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮。0029在本发明中， 所述催化剂优选为一水合对甲苯磺酸； 所述甲瓦龙酸内酯与催化剂的质量比优选为20:1； 在本发明中， 所述消去反应使用的溶剂优选为甲苯， 本发明对所述溶剂的用量没有特殊的要求， 能够将所述甲瓦龙酸内酯和催化剂溶解即可。 在本发明中， 所述消去反应的温度优选为反应液的回流温度， 时间优选为19h。0030在本发明中， 所述消去反应后还包括对消去反应液的后处理， 所述后处理包括以下步骤：0031对所述消去反应液依次进行抽滤、 硅胶柱层析和洗脱， 得到纯净的4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮。0032在本发明中， 所述抽滤优选为减压抽滤， 所述抽滤的时间优选为1h； 本发明对所述硅胶柱层析的方式没有特殊的要求， 使用本领域技术人员熟知的硅胶柱层析的方式即可。在本发明中， 所述洗脱的方式优选为石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱， 所述石油醚-乙酸乙酯的体积比优选为10:12:1。0033在本发明中， 所述消去反应的反应式如式I所示：00340035本发明提供了4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮为有效成分与药学上可接受的载体组成的组合物在制备抗肝纤维化药物和抗肝癌药物中的应用。 本发明对所述载体的种类没有特殊要求， 可以包括一种或多种药学上可接受的载体。0036在本发明中， 所述组合物可以制备成多种剂型， 以便于给药。 在本发明中， 所述组合物的剂型具体可为肠道外用药制剂， 具体的如注射剂、 栓剂； 所述注射剂可以为溶液、 混悬液或者可注射的干燥粉末(在注射前加入注射水可立即使用)； 所述注射剂除包括有效成分外， 还优选包括以下载体或助剂： 生理上可接受的无菌含水或非水溶液剂、 分散剂、 混悬剂、 乳剂、 合适的含水或非水载体、 稀释剂、 溶剂或媒介物， 具体的如水、 乙醇、 多元醇(丙二醇、 聚乙二醇、 甘油等)、 植物油(如橄榄油)和可注射有机酯中的一种或多种， 所述可注射有机酯优选包括油酸乙酯。0037在本发明中， 所述抗肝纤维化和抗肝癌药物具体可为口服制剂， 所述口服制剂具体可以为固体剂型或液体剂型； 所述固体剂型具体的如片剂、 糖衣丸剂、 丸剂、 散剂、 颗粒剂、 胶囊剂或包衣剂， 所述液体剂型具体的可为乳剂、 溶液剂、 混悬剂、 糖浆剂或酏剂。0038本发明提供了4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备肝纤维化和肝癌预防保健品中的应用。 本发明所述4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮用于肝纤维化和肝癌预防保健品时， 4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮可以制成任何常规口服剂型， 如片剂、 胶囊、 散剂、 颗粒等； 或制成注射液说明书3/9 页5CN 110339188 A5针剂等非口服剂型。 本发明所述4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮用于肝纤维化和肝癌预防保健品时， 其辅料可选用药学上可接受的任何形式。0039本发明提供了一种用于抗肝纤维化和抗肝癌的药物， 所述药物的有效成分包括4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮的衍生物、 药学上可接受的盐、 溶剂化物、 代谢产物、 立体异构体、互变异构体、 多晶型物、 药物前体。0040在本发明中， 所述用于抗肝纤维化和抗肝癌的药物的剂量需要根据给药方式、 患病程度、 患者年龄、 有无既往病史等因素综合考虑进行调整。0041下面结合实施例对本发明提供的4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮在制备抗肝纤维化和抗肝癌药物中的应用进行详细的说明， 但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。0042实施例1 4-甲基-5,6-二氢吡喃-2酮对LX2细胞没有毒性0043