【发明专利】头孢曲松钠有关物质检测方法、头孢曲松钠二聚体及其制备方法和应用 CN114414714A.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202210082559.8(22)申请日 2022.01.24(71)申请人 武汉九州钰民医药科技有限公司地址 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二路388号武汉光谷国际生物医药企业加速器一期工程一号厂房1单元509室(72)发明人 刘均均龚丹凤张璐姚萌霞陈龙陈程柳少群(74)专利代理机构 上海弼兴律师事务所 31283代理人 钟华陈卓(51)Int.Cl.G01N 30/06(2006.01)G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称头孢曲松钠有关物质检测方法、 头孢曲松钠二聚体及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种头孢曲松钠有关物质检测方法、 头孢曲松钠二聚体及其制备方法和应用。 本发明提供的头孢曲松钠有关物质的检测方法， 其包含以下步骤： 采用高效液相色谱法对头孢曲松钠待测品进行检测， 色谱条件包括： 色谱柱为C18色谱柱； 流动相A为甲酸甲酸铵缓冲液；流动相B为甲酸甲酸铵缓冲液和乙腈的混合液；其中所述甲酸甲酸铵缓冲液与所述乙腈的体积比为3/71/9； 所述高效液相色谱法的洗脱程序为梯度洗脱。 本发明的检测方法首次实现了头孢曲松钠制品中本发明的头孢曲松钠二聚体杂质的分离鉴定， 对该类杂质专属性强、 灵敏度、 准确度和重现性俱佳， 可广泛应用于头孢曲松钠制品的质量控制。权利要求书3页 说明书22页 附图2页CN 114414714 A2022.04.29CN 114414714 A1.一种头孢曲松钠有关物质的检测方法， 其包含以下步骤： 采用高效液相色谱法对头孢曲松钠待测品进行检测， 色谱条件包括：色谱柱为C18色谱柱；流动相A为甲酸甲酸铵缓冲液；流动相B为体积比为3/71/9的甲酸甲酸铵缓冲液和乙腈的混合液；所述高效液相色谱法的洗脱梯度为： 2530min内， 流动相A由9095v下降至5075v， 流动相B由510v上升至2550v。2.如权利要求1所述的头孢曲松钠有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述头孢曲松钠待测品为头孢曲松钠原料药或头孢曲松钠制剂；和/或， 在进行检测前， 对所述头孢曲松钠待测品进行预处理， 具体为： 用稀释剂溶解所述头孢曲松钠待测品， 放置。3.如权利要求2所述的头孢曲松钠有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述检测方法满足以下条件中的一种或多种：(1)所述稀释剂为水、 pH 1.82.5的甲酸甲酸铵缓冲液或pH7.0的磷酸盐缓冲液；(2)所述的放置的温度为580；(3)所述放置的时间为410h；较佳地， 所述检测方法满足以下条件中的一种或多种：(I)所述稀释剂为水或pH7.0的磷酸盐缓冲液；(II)所述的放置的温度4060；(III)所述放置的时间为48h；更佳地， 所述检测方法满足以下条件中的一种或多种：(i)所述稀释剂为水；(ii)所述的放置的温度60；(iii)所述放置的时间为8h；例如， 所述的预处理为： 用水溶解头孢曲松钠待测品， 60下放置8h。4.如权利要求1所述的头孢曲松钠有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述色谱柱为YMCPack ODSAQ或Waters Xbridge C18色谱柱；较佳地， 所述色谱柱满足以下条件中的一种或多种：(1)所述色谱柱为Waters Xbridge C18色谱柱；(2)所述色谱柱的长度为150250mm； 例如150mm；(3)所述色谱柱的内径为4.6mm；(4)所述色谱柱中填料的粒径为3.55 m； 例如3.5 m；更佳地， 所述色谱柱的规格为： 长度150mm， 内径4.6mm， 填料粒径3.5 m。5.如权利要求1所述的头孢曲松钠有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述流动相满足以下条件中的一种或两种：(1)所述甲酸甲酸铵缓冲液的pH为1.82.5， 例如1.8、 2.0或2.2；(2)所述甲酸甲酸铵缓冲液的浓度为0.005mol/L0.02mol/L， 例如0.01mol/L；较佳地， 所述流动相B为体积比为20:80的pH2.0、 0.01mol/L甲酸甲酸铵缓冲液和乙腈的混合液。权利要求书1/3 页2CN 114414714 A26.如权利要求1所述的头孢曲松钠有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述洗脱梯度中， 流动相A由9095v下降至7075v；所述洗脱梯度优选：洗脱阶段洗脱时长流动相A流动相B第一洗脱阶段15min9095v下降至8085v510v上升至1520v第二洗脱阶段15min8085v下降至7075v1520v上升至2530v进一步优选：洗脱阶段洗脱时长流动相A流动相B第一洗脱阶段15min9095v下降至8085v510v上升至1520v第二洗脱阶段5min8085v下降至7075v1520v上升至2530v第三洗脱阶段10min保持7075v保持2530v最优选：洗脱阶段洗脱时长流动相A流动相B第一洗脱阶段15min90v下降至80v10v上升至20v第二洗脱阶段5min80v下降至75v20v上升至25v第三洗脱阶段10min保持75v保持25v其中， 所述洗脱时长为该洗脱阶段的洗脱终点时间与洗脱起点时间的差值。7.如权利要求1所述的头孢曲松钠有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述检测方法满足以下条件中的一种或多种：(1)流动相的流速为0.450.55ml/min；(2)检测器为DAD或UV检测器；(3)检测波长为245260nm；(4)色谱柱的柱温为3542(5)进样量为1020 L；较佳地， 所述检测方法满足以下条件中的一种或多种：(I)流动相的流速为0.45ml/min、 0.5ml/min或0.55ml/min；(II)检测波长为249259nm； 例如249nm、 254nm或259nm；(III)色谱柱的柱温为35、 38、 40或42；(IV)进样量为10 L。8.一种头孢曲松钠二聚体的制备方法， 其特征在于， 其包括以下步骤： 按如权利要求17任一项所述的头孢曲松钠有关物质的检测方法处理， 之后收集头孢曲松钠二聚体色谱峰的馏分； 较佳地， 收集主峰之后依次出现的相对保留时间分别为16 .0min18 .5min、16.6min19.8min、 23.5min25.1min、 26.1min28.2min和26.7min30min的5个峰的馏分。9.头孢曲松钠二聚体， 其特征在于， 其为以下任一化合物：权利要求书2/3 页3CN 114414714 A310.如权利要求9所述的头孢曲松钠二聚体在制备头孢曲松钠有关物质对照品或标准品的应用。权利要求书3/3 页4CN 114414714 A4头孢曲松钠有关物质检测方法、 头孢曲松钠二聚体及其制备方法和应用技术领域0001本发明涉及头孢曲松钠有关物质检测方法、 头孢曲松钠二聚体及其制备方法和应用。背景技术0002头孢曲松钠是一种具有抗感染作用的第三代头孢菌素类抗生素， 属于 内酰胺类抗生素。 通过抑制细菌细胞壁的生物合成， 导致细菌细胞溶菌死亡， 从而起抗菌作用。 对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌及部分厌氧菌均有良好的抗菌活性。 内酰胺类抗生素易发生聚合反应， 生成聚合物杂质诱发过敏反应。0003中国药典 2020版对头孢曲松钠聚合物质控， 采用葡聚糖凝胶G10分子排阻色谱法， 紫外检测器检测， 对样品中聚合物峰进行检测； 高效凝胶排阻色谱法分离头孢曲松钠聚合物杂质时， 部分小分子杂质与聚合物共出峰， 方法专属性差、 定量准确性差； 基于目前测定头孢类抗生素药物中聚合物含量所存在的问题， 迫切需要一种更为准确、 有效的新方法。发明内容0004本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的头孢曲松钠杂质检测方法对聚合物杂质专属性和定量准确性差的缺陷， 而提供一种对头孢曲松钠聚合物杂质专属性强、 且灵敏度、 准确度和重现性俱佳的头孢曲松钠有关物质的检测方法， 以及新分离检测出的头孢曲松钠二聚体及其制备方法和应用。0005本发明通过下述技术方案解决上述技术问题。0006本发明提供了一种头孢曲松钠有关物质的检测方法， 其包含以下步骤： 采用高效液相色谱法对头孢曲松钠待测品进行检测， 色谱条件包括：0007色谱柱为C18色谱柱；0008流动相A为甲酸甲酸铵缓冲液；0009流动相B为体积比为3/71/9的甲酸甲酸铵缓冲液和乙腈的混合液；0010所述高效液相色谱法的洗脱梯度为： 2530min内， 流动相A由9095v下降至5075v， 流动相B由510v上升至2550v。0011本发明中， 所述有关物质是指任何影响药物纯度的物质。0012本发明中， 所述头孢曲松钠待测品可为各类头孢曲松钠制品， 如头孢曲松钠原料药或头孢曲松钠制剂。0013本发明中， 在进行检测前， 可对所述头孢曲松钠待测品进行预处理， 具体可为： 用稀释剂溶解所述头孢曲松钠待测品， 放置。0014其中， 所述稀释剂可为各类可溶解头孢曲松钠待测品， 且对后续检测无影响的稀释溶剂， 如水、 pH1.82.5的甲酸甲酸铵缓冲液或pH7.0的磷酸盐缓冲液， 优选水或pH7.0的磷酸盐缓冲液， 最优选说明书1/22 页5CN 114414714 A50015其中， 所述放置的温度和时间以加速头孢曲松钠待测品中杂质生成进行选择， 且以同时不过度破坏头孢曲松钠为最适宜。 所述的放置的温度可为580， 优选4060， 更优选60。 所述放置的时间可为410h， 优选48h， 更优选8h。0016本发明一较佳实例中， 所述的预处理为： 用水溶解头孢曲松钠待测品， 60下放置8h。0017本发明中， 所述色谱柱可按本领域常规选择各类C18色谱柱， 如： YMCPack ODSAQ或Waters Xbridge C18色谱柱， 较佳地为Waters Xbridge C18色谱柱。 所述色谱柱的长度可为150250mm， 如150mm。 所述色谱柱的内径可为4.6mm。 所述色谱柱中填料的粒径可为3.55 m， 如3.5 m。 较佳的， 所述色谱柱的规格为： 长度150mm， 内径4.6mm， 填料粒径3.5 m。0018本发明中， 所述流动相中， 所述甲酸甲酸铵缓冲液的pH和浓度可按本领域常规。所述甲酸甲酸铵缓冲液的pH优选1.82.5， 最优选1.8、 2.0或2.2。 所述甲酸甲酸铵缓冲液的浓度优选0.005mol/L0.02mol/L， 优选0.01mol/L。0019本发明一较佳实例中， 所述流动相B为体积比为20:80的pH2.0、 0.01mol/L甲酸甲酸铵缓冲液和乙腈的混合液。0020本发明中， 所述洗脱梯度中， 流动相A优选由9095v下降至7075v。0021所述洗脱梯度更优选：0022洗脱阶段洗脱时长流动相A流动相B第一洗脱阶段15min9095v下降至8085v 510v上升至1520v第二洗脱阶段15min8085v下降至7075v 1520v上升至2530v0023进一步优选：0024洗脱阶段洗脱时长流动相A流动相B第一洗脱阶段15min9095v下降至8085v 510v上升至1520v第二洗脱阶段5min8085v下降至7075v 1520v上升至2530v第三洗脱阶段10min保持7075v保持2530v0025最优选：0026洗脱阶段洗脱时长流动相A流动相B第一洗脱阶段15min90v下降至80v10v上升至20v第二洗脱阶段5min80v下降至75v20v上升至25v第三洗脱阶段10min保持75v保持25v0027其中， 所述洗脱时长为该洗脱阶段的洗脱终点时间与洗脱起点时间的差值。0028本发明中， 所述流动相的流速可按本领域常规， 可为0.450.55ml/min， 优选0.45ml/min、 0.5ml/min或0.55ml/min。0029本发明中， 所述高效液相色谱法中， 检测波长可按本领域常规， 一般可为245260nm， 优选249259nm， 最优选249nm、 254nm或259nm。 检测器可按本领域