【发明专利】天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法 CN114460191A.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202210063450.X(22)申请日 2022.01.20(71)申请人 广西壮族自治区食品药品检验所地址 530021 广西壮族自治区南宁市青秀区青湖路9号(72)发明人 覃丽郦李丽莉吴桂凡陆游谷立勍甘勇强凌婕(74)专利代理机构 南宁市来来专利代理事务所(普通合伙) 45118专利代理师 来光业(51)Int.Cl.G01N 30/02(2006.01)G01N 30/06(2006.01)G01N 30/14(2006.01) (54)发明名称天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法(57)摘要本发明公开了一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法， 属于中医药检测技术领域。 该方法通过采用超高效液相色谱仪进行测定天王补心丸/天王补心丸 （浓缩丸） 中地黄苷D的含量，方法简单、 操作简便、 测定准确， 专属性强， 检测效率高， 采用该方法能方便快速的检测出天王补心制剂中地黄苷D的含量， 有利于考察天王补心制剂中地黄的质量情况， 检查企业是否存在不投料或少投料、 劣药材投料的行为， 从而有利于进一步准确、 全面的控制天王补心制剂的质量， 确保临床药效。权利要求书1页 说明书18页 附图6页CN 114460191 A2022.05.10CN 114460191 A1.一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法， 其特征在于， 所述天王补心制剂包括天王补心丸与天王补心丸 （浓缩丸） ， 该测定方法包括以下步骤：（1） 色谱条件与系统适用性试验： 在UPLC上分析， 以Waters ACQUITY UPLC HSS T3为色谱柱； 甲醇0.1%磷酸为流动相， 流动相中甲醇： 0.1%磷酸的体积比为1.5： 98.5；检测波长为203nm， 流速为每分钟0.3ml， 理论板数按地黄苷D峰计算应不低于3000；（2） 对照品溶液的制备： 取地黄苷D对照品适量， 加25%甲醇制成每1ml含50 g的对照品溶液；（3） 供试品溶液的制备： 取本品水蜜丸样品适量， 研细， 取2.3g， 精密称定； 或取大蜜丸、小蜜丸， 剪碎， 取3g， 精密称定； 或取浓缩丸适量， 研细， 取0.9g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇溶液25ml， 称定重量， 加热回流1小时， 取出， 放冷， 再称定重量， 用25%甲醇溶液补足减失的重量， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得；（4） 测定： 分别精密吸取对照品溶液2 l、 水蜜丸、 大蜜丸、 小蜜丸供试品溶液溶液2 l、浓缩丸供试品溶液溶液4 l， 注入超高效液相色谱仪， 测定， 即得。2.根据权利要求1所述天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法， 其特征在于， 所述的天王补心制剂,本品含地黄以地黄苷D （C27H42O20） 计， 水蜜丸每1g不得少于0.17mg； 小蜜丸每1g不得少于0.11mg； 大蜜丸每丸不得少于1.00mg； 浓缩丸每1g不得少于0.32mg。权利要求书1/1 页2CN 114460191 A2天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法技术领域0001本发明属于中医药检测技术领域， 具体涉及一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法。背景技术0002天王补心制剂具滋阴养血， 补心安神之功效； 临床用于心阴不足， 心悸健忘， 失眠多梦， 大便干燥。 天王补心制剂包括天王补心丸与天王补心丸 （浓缩丸） ， 这两者的处方均由丹参， 当归， 石菖蒲， 党参， 茯苓， 五味子， 麦冬， 天冬， 地黄， 玄参， 远志(制)， 酸枣仁(炒)， 柏子仁， 桔梗， 甘草， 朱砂等16味药材组成。 天王补心丸为棕黑色的水蜜丸、 褐黑色的小蜜丸或大蜜丸； 气微香， 味甜、 微苦； 天王补心丸 （浓缩丸） 为棕黑色浓缩丸； 气微香， 味甘、 苦。 该方剂最早可追溯自宋代陈自明 妇人大全良方 卷六， 后经明代薛已校注。 明代洪九 摄生总要 中亦有记载 “治心血不足， 神志不宁， 津液枯竭， 健忘怔忡， 大便不利， 口舌生疮等证。 ” 现代医学报道表明， 天王补心丸临床可治疗失眠、 焦虑、 抑郁、 神经衰弱、 甲状腺功能亢进引起的眩晕等， 2015年版 中国药典 一部成药制剂中对其进行了收载。0003天王补心制剂处方中地黄为方中君药， 具滋阴养血之功效。 地黄 （拉丁学名：Rehmannia glutinosa (Gaetn.) Libosch. ex Fisch. et Mey.） 为重要的补益中药,在临床上应用比较广泛。 地黄的化学成分以甙类为主， 其中又以环烯醚萜甙类为主,此类成分结构近似,极性较大,稳定性较差。 曾对地黄中环烯醚苷类成分梓醇进行分离制备,研究发现地黄从鲜品加工成生地黄及熟地黄， 梓醇的含量降低至原来的1/10， 而地黄苷D比较稳定,生地、 熟地中含量均较高。 且地黄苷D具有滋阴补血的作用， 为地黄的主要有效成分。 有关中药饮片中地黄中地黄苷D的含量测定已有相关报道， 但目前未见有对天王补心制剂中地黄苷D含量进行测定的相关报道， 在天王补心制剂中对地黄成分的含量测定方面的研究报道也很少。 天王补心制剂的现行标准 【含量测定】 中， 天王补心丸控制的指标仅为五味子中的五味子醇甲， 天王补心丸 （浓缩丸） 控制的指标仅为丹参中的丹酚酸B， 不能有效、 全面的评价天王补心制剂的质量。 因此， 研发一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法， 有利于考察天王补心制剂中地黄的质量情况， 更好的控制天王补心制剂的质量， 确保临床药效。发明内容0004本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供的一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法。 该方法操作简单、 准确， 方便快捷， 检测效率高， 专属性好， 采用该方法能方便快速的检测出天王补心制剂中地黄苷D的含量， 从而能有效的控制天王补心制剂的质量，确保临床药效。0005为实现上述目的， 本发明采用如下的技术方案：一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法， 所述天王补心制剂包括天王补心丸与天王补心丸 （浓缩丸） ， 该测定方法包括以下步骤：（1） 色谱条件与系统适用性试验： 在UPLC上分析， 以Waters ACQUITY UPLC HSS 说明书1/18 页3CN 114460191 A3T3 （1.8 m， 2.1100mm） 为色谱柱； 甲醇0.1%磷酸 （1.5： 98.5） 为流动相； 检测波长为203nm，流速为每分钟0.3ml， 理论板数按地黄苷D峰计算应不低于3000；（2） 对照品溶液的制备： 取地黄苷D对照品适量， 加25%甲醇制成每1ml含50 g的对照品溶液；（3） 供试品溶液的制备： 取本品水蜜丸样品适量， 研细， 取约2.3g， 精密称定； 或取大蜜丸、 小蜜丸， 剪碎， 取约3g， 精密称定； 或取浓缩丸适量， 研细， 取约0.9g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入25%甲醇溶液25ml， 称定重量， 加热回流1小时， 取出， 放冷， 再称定重量， 用25%甲醇溶液补足减失的重量， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得；（4） 测定： 分别精密吸取对照品溶液2 l、 水蜜丸、 大蜜丸、 小蜜丸供试品溶液溶液2 l、 浓缩丸供试品溶液溶液4 l， 注入超高效液相色谱仪， 测定， 即得。0006所述的天王补心制剂,本品含地黄以地黄苷D （C27H42O20） 计， 水蜜丸每1g不得少于0.17mg； 小蜜丸每1g不得少于0.11mg； 大蜜丸每丸不得少于1.00mg； 浓缩丸每1g不得少于0.32mg。0007本发明的有益效果为：本发明提供了一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法， 通过采用超高效液相色谱仪进行测定天王补心丸/天王补心丸 （浓缩丸） 中地黄苷D的含量。 该方法操作简单、测定准确， 检测效率高， 误差小， 采用该方法能方便快速的检测出天王补心制剂中地黄苷D的含量， 从而能有效的控制天王补心制剂的质量， 确保临床药效。0008本发明的方法通过了方法学验证， 精密度高、 灵敏度高、 专属性强， 重现性好、 稳定性好、 回收率高、 测定结果准确， 完善了天王补心制剂的质量检测标准。 采用本发明方法进行检测天王补心制剂中地黄苷D含量， 有利于考察天王补心制剂中地黄的质量情况， 检查企业是否存在不投料或少投料、 劣药材投料的行为， 从而有利于进一步准确、 全面的控制天王补心制剂的质量。附图说明0009图1 天王补心丸 （大蜜丸） （北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂， 生产批号：20015229） Waters液相色谱图；图2 天王补心丸 （大蜜丸） （北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂， 生产批号：20015229） Waters超高效液相色谱图；图3 天王补心丸 （大蜜丸） （北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂， 生产批号：20015229） 色谱图；图4 天王补心丸 （水蜜丸） （广州白云山敬修堂药业股份有限公司， 生产批号：K01007） 色谱图；图5 天王补心丸 （浓缩丸） （兰州佛慈制药股份有限公司， 批号： 20A6） 色谱图；图6 地黄苷D紫外吸收图谱；图7 地黄苷D标准曲线图；图8 地黄苷D对照品图谱；图9 天王补心丸模拟样图谱；图10 天王补心丸阴性样 （缺地黄） 图谱；说明书2/18 页4CN 114460191 A4图11 天王补心丸 （大蜜丸） （北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂， 生产批号：20015229） 色谱图；图12 天王补心丸 （浓缩丸） 模拟样图谱；图13 天王补心丸 （浓缩丸） 阴性样 （缺地黄） 图谱；图14 天王补心丸 （浓缩丸） （仲景宛西制药股份有限公司， 批号： 200504） 色谱图；图15 地黄苷D对照品混合溶液色谱图；图16 天王补心丸 （大蜜丸） （北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂， 生产批号：20015229） 色谱图；图17 天王补心丸 （水蜜丸） （承德御室金丹药业有限公司， 生产批号： 191101） 色谱图；图18 天王补心丸 （小蜜丸） （九芝堂股份有限公司， 生产批号： 202010029） 色谱图；图19 天王补心丸 （浓缩丸） （仲景宛西制药股份有限公司， 批号： 200504） 色谱图。具体实施方式0010实施例11、 仪器与试药Waters超高效液相色谱仪ACQUITY UPLC HCLASS； ML204型电子分析天平 （梅特勒托利多仪器上海有限公司） 。 地黄苷D （中国食品药品检定研究院提供， 供含测用， 批号：112063201815， 含量96.9%） ， 甲醇为色谱纯， 其他试剂均为分析纯。 色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3 （1.8 m， 2.1100mm） 。 127批天王补心丸 （其中大蜜丸62批， 小蜜丸30批， 水蜜丸35批） ； 31批天王补心丸 （浓缩丸） 均为2021年国家评价性抽验的样品。0011方法考察所用石斛夜光丸 （大蜜丸） 为北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂， 批号： 20015229； 天王补心丸 （水蜜丸） 为太极集团重庆桐君阁药厂有限公司， 批号： 20060002；天王补心丸 （浓缩丸） 为兰州佛慈制药股份有限公司， 批号： 20A6。00122、 本发明实验条件的考察及方法学验证2.1 仪器的选择： 参考文献报道， 分别比较了以甲醇0.1%磷酸溶液为流动相， 分别在液相色谱仪和超高效液相色谱仪上进行试验。 由于地黄苷D属紫外末端吸收， 吸收较弱； 天王补心丸药味多， 干扰杂峰多， 经摸索， 确定以超高效液相色谱仪作为分析仪器， 在此梯度下， 地黄苷D出峰时间较早， 峰形对称， 分离效果好， 见图12。00132.2 流动相的选择： 参考文献报道， 分别比较了以甲醇水、 乙腈水、 甲醇0.1%磷酸溶液、 乙腈0.1%磷酸溶液为流动相。 经摸索， 确定以甲醇0.1%磷酸 （1.5： 98.5） 为流动相， 在此条件下， 分离效果好， 峰形对称