DB45∕T 1859-2018 红腺忍冬组培快繁技术规程.pdf

ICS 65.020.20 B 38 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB 45/T 18592018 红腺忍冬组培快繁技术规程 Tissue culture and rapid propagation techniques regulation of Lonicera hypoglauca Miq 2018 - 10 - 20 发布 2018 - 11 - 20 实施广西壮族自治区质量技术监督局 发 布 DB45/T 18592018 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 组培快繁 . 1 4 移栽和出圃 . 2 5 包装与运输 . 3 6 生产档案 . 3 附录 A（规范性附录）培养基配方 . 5 DB45/T 18592018 III 前 言 本标准按照GB/T 1.12009 给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区卫生和计划生育委员会提出。 本标准由广西卫生标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：广西壮族自治区药用植物园。 本标准主要起草人：师凤华、谭木秀、蒲祖宁、郭晓云、李翠。 DB45/T 18592018 1 红腺忍冬组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了红腺忍冬（Lonicera hypoglauca Miq ）组培快繁、移栽和出圃、包装与运输、生产档案等的要求。 本标准适用于广西境内红腺忍冬的组培快繁育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 393 绿色食品 农药使用准则 国家药品监督管理局第32 号令（2002 年） 中药材生产质量管理规范（试行） 3 组培快繁 3.1 外植体来源 选择生长健壮、长势一致、无病虫危害的具46片真叶的红腺忍冬种子实生苗植株为外植体。 3.2 外植体取材及记录 3.2.1 取材时间 宜于连续晴天2 d以上，上午9:0011:00取材。 3.2.2 取材部位 选取具46片真叶的幼嫩种子实生苗无根植株。 3.2.3 取材记录 对每份材料宜记录采集号、采集地点、生长环境、采集时间、采集人等信息，建立外植体采集信息档案。红腺忍冬采集记录表见表1。 表1 红腺忍冬取材记录表 序号 采集号 采集地点 生长环境 采集时间 采集人 备注 DB45/T 18592018 2 3.3 外植体诱导 3.3.1 预处理 用软毛刷于 0.05洗洁精水中轻轻刷洗外植体表面灰尘杂质后，于自来水下流水冲洗 30 min，沥干材料表面水分，放入灭菌玻璃瓶内，材料所占空间控制在容积的 1/3 之内。 3.3.2 灭菌 于超净工作台上，将外植体先用 75%酒精浸泡 30 s，无菌水冲洗 3 次，再于 0.1HgCl2（加 23滴吐温-20）中灭菌 5 min后，无菌水冲洗 46 次，取无菌滤纸吸干外植体的表面水分。 3.3.3 诱导培养 于超净工作台上剪去已灭菌的外植体旧切口，以芽端朝上插入外植体诱导培养基中，培养基按附录 A中 A.1 的要求配制；剪除碰触培养基的叶片部分，每瓶接种外植体 23 个（此为 220 mL 规格的组培瓶接种量），培养 30 d50 d。 3.4 继代培养 将生长健壮的无菌组培芽苗，分别剪取 1.5 cm2.0 cm长的顶芽或带 23 个腋芽的茎段插入继代培养基中，培养基按附录A中A.2 的要求配制，进行继代增殖培养，继代周期为 30 d50 d。 3.5 生根培养 将生长健壮的无菌组培芽苗，分别剪取3.0 cm5.0 cm长的顶芽或带23个腋芽的茎段插入生根培养基中，培养基按附录A中A.3的要求配制，进行生根培养，培养30 d50 d。 3.6 培养条件 培养室温度为（253），相对湿度为5075，每天光照时间为12 h，光照强度为2 000 lx3 000 lx。 4 移栽和出圃 4.1 苗床选址 选择背风向阳、排灌良好的地方搭建育苗大棚，配备6070遮阳网和防虫网。 4.2 苗床构建及消毒 苗床宜宽1 m1.1 m，长10 m15 m。将泥碳土、肥沃苗土、珍珠岩按比例为2:1:1搅拌均匀后作为基质，并淋施0.5 g/L的多菌灵和0.8 g/L的高锰酸钾混合液消毒，15 d20 d后将基质装进容积为300 mL的塑料营养杯，并整齐摆放于苗床上备用。 4.3 炼苗 将符合炼苗条件（根数3条、根长2 cm、叶片数5张的健壮植株）的生根瓶苗，于室内常温下封盖2 d3 d之后打开瓶盖，加入高于培养基表面0.4 cm0.5 cm的清水，每天早、中、晚对苗各进行1次喷雾保湿，炼苗5 d7 d。 DB45/T 18592018 3 4.4 洗苗 从培养瓶中取出经过炼苗驯化的组培苗，用清水轻轻漂洗干净。 4.5 移栽 将洗好的组培苗移栽至苗床上的杯装基质中， 移栽深度以基质盖过组培苗根部为宜， 栽苗后对基质稍压实，以苗不倒的程度即可，应及时浇透定根水，并标记材料名称及移栽日期。 4.6 日常管理 4.6.1 环境条件 移栽大棚温度为2030，相对湿度为8095，自然光照强度为6070；初期避风培育种苗，待苗根系稳扎于移栽基质中（移栽后45周），应适当通风育苗。 4.6.2 水肥管理 移栽后，应保持培养基质湿润；移栽4周后至出圃的生长期内，每周喷施0.1%的复合肥1次。移栽6周时统计组培苗成活率。 4.6.3 主要病虫害防治 移栽后，根据病虫害实际情况，对病虫害状况进行针对性防治。药物使用应符合NY/T 393的规定。 4.7 出圃苗质量要求 幼苗长出5片以上新叶、生长健壮、苗高20 cm、根系发达、植株完整且无病虫害。 5 包装与运输 5.1 包装 出圃苗按苗高整齐分装入规格统一、高出苗顶面5 cm以上的竹筐或塑料筐内，及时喷水，在装载物外表面贴上标签，标注品种名称、数量、产地、种苗经营许可证编号、生产单位名称、地址、联系人等。 5.2 运输 苗应有序叠放，不得过度挤压和随意堆叠；长途运输应有防风、防晒、防雨措施；运输过程中温度应保持在1025，以免高温烧苗。 6 生产档案 应符合国家药品监督管理局第32号令（2002 年）中第九章的规定，并对组培快繁育苗技术的各环节所采取的措施进行详细记录，建立生产档案，记录表见表2。 DB45/T 18592018 4 表2 红腺忍冬组培快繁育苗记录表 序号/批次 数量 （株） 日期 施肥 病虫害防治 负责人员 炼苗 移栽 出圃 种类 施用时间 浓度 方法 病虫害种类 用药名称 施用时间 浓度 施药方法 A DB45/T 18592018 5 A B 附 录 A （规范性附录） 培养基配方 A.1 诱导培养基 MS+蔗糖 30 g/L+琼脂 6 g/L+6-BA 2.0 mg/L+ GA3 0.3 mg/L（pH 5.8pH 6.0） 。 A.2 继代培养基 MS+蔗糖 30 g/L+琼脂 6 g/L+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.02 mg/L+GA3 1.5 mg/L（pH 5.8pH 6.0） 。 A.3 生根培养基 1/2 MS+蔗糖 30 g/L+琼脂 6 g/L+NAA 0.2 mg/L（pH 5.8pH 6.0） 。 C D E F 中华人民共和国广西地方标准 红腺忍冬组培快繁技术规程 DB45/T 18592018 广西壮族自治区质量技术监督局统一印刷 版权专有 侵权必究